Schnelltest zur in-vitro-Diagnostik des Progesteronspiegels bei Klein- und Grosstieren

Feststellen der fertilen Periode bei der Hündin
Die sichtbaren Anzeichen einer Läufigkeit (Schwellung der Vulva, Vaginalausfluss, Attraktion des Rüden) sind nur ungefähre Anzeichen und reichen nicht aus, um den optimalen Deckzeitunkt bei der Hündin festzustellen. Grosse individuelle Unterschiede erschweren es zudem, den Besamungszeitpunkt vorzuplanen. Zur Bestimmung von Pröstrus und Östrus ist ein vaginalzytologischer Untersuch ist daher unverzichtbar.

Der LH-Peak (Luteinisierendes Hormon) geht stets der Ovulation voraus. Wenn dieser Zeitpunkt als Tag 0 festgelegt wird, kann mit der Ovulation in den kommenden 2 Tagen gerechnet werden. Die Eizellreifung nach der Ovulation beansprucht durchschnittlich 2–3 Tage. Die Ozysten sind während 48–72 h nach der Reifung befruchtungsfähig. Die fertile Periode bei der Hündin befindet sich daher 5–6 Tage nach dem LH-Peak. Die Erhöhung der Progesteronspiegels kann, je nach Publikation und Nachweistechnik, zum Ovulations-Zeitpunkt 6- 8 ng/ml erreichen. Wie in der unter „Testauswertung“ aufgeführten Tabelle ersichtlich ist, sind die Progesteronwerte vor der Ovulation tief ( 0–1 ng/ml, leuchtblaue Farbe des Testfeldes). Mit steigendem Progesteronspiegel ändert die Farbe des Testfeldes von Grellblau zu Hellblau, was dem Zeitpunkt des LH-Peaks (Tag 0) entspricht. Während der Progesteronwert während den kommenden Tagen weiter ansteigt, ändert die Farbe im Testfeld zunächst in Blassblau, dann in Weiss.

Zu einer Trächtigkeit kann es nur kommen, sofern befruchtungsfähige Oozyten (durchschnittlich 2 Tage nach der Ovulation) und lebendige Spermien (durchschnittlich 5 Tage) vorhanden sind. 20% der Hündinnen ovulieren ausserhalb des 10.–14. Tages der Läufigkeit. Nach Dumon erlaubt nur die kombinierte Beurteilung von Vaginalzytologe und Progesteronwert den optimalen Deck- oder Besamungszeitpunkt festzulegen und dadurch eine Erfolgsrate von 95% und erhöhte Fruchtbarkeitsrate zu erzielen.

Weitere Anwendungsgebiete bei der Hündin
- Feststellen des Wurftermins: Ein Progesteronwert < 1 ng/ ml deutet in
  Kombination mit anderen Vorzeichen (Körpertemperatur, lait blanc,
  Ultraschaluntersuchung) darauf hin, dass die Geburt innerhalb der nächsten
  24–48 h stattfindet.
- Abklären von Fruchtbarkeitsstörungen: stille Läufigkeit, Läufigkeit ohne
  Ovulation.
- Prävention von Abortrisiko aufgrund Gelbkörper-Insuffizienz, beim Anpassen
  einer medikamentellen Substitution.

Mögliche Anwendungsgebiete bei anderen Tierarten: Kühe und Pferde
- Kontrolle des Trächtigkeitsbeginns
- Überprüfen der Wirkung von Progestagenen oder Medikamenten mit
  progestagiver Wirkung

Testprinzip
Beim Ovulation® Test handelt es sich um einen zuverlässigen und einfach durchzuführenden ELISA–Schnelltest mit visueller Auswertung, um das Progesteron im Serum oder dem Plasma der Hündin semiquantitativ nachzuweisen. Die Bestimmung des Progesteronspiegels hilft den Ovulationszeitpunkt festzustellen und dadurch den richtigen Zeitpunkt für die Paarung oder Insemination der Hündin festzulegen. Der Ovulation® Test bietet eine ideale Ergänzung zur Vaginalzytologie um den Verlauf der Läufigkeit zu verfolgen.

Vorsichtsmassnahmen und Hinweise
Wann testen?
Den genauen Zeitpunkt des Proöstrus mittels Vaginalzytologie ermitteln. Die Vaginalzytologie bietet eine Unterstützung, um das Herannahen des LH-Peaks zu erkennen und zu diesem Zeitpunkt mit der Bestimmung des Progersteronwertes zu beginnen. In der Regel sind 1–2 Tests ausreichend, im Wissen, dass die Ovulation um den 2. Tag nach dem LH-Peak stattfindet (zwischen dem 10. und 14. Tag nach Beginn der Läufigkeit). Die Häufigkeit der Testdurchführung ist individuell abhängig vom jeweiligen Läufigkeitsstadium und der bekannten Vorgeschichte des Tieres.

Vorsichtsmassnahmen
Den Beutel mit den Testzylindern hermetisch verschlossen halten. Die Lösungen und Testzylinder der einzelnen Chargen und Verpackungen dürfen nicht untereinander ausgetauscht werden.

Angaben zum Probematerial
Das Blut kann in antikoagulationsbeschichtete (Heparin oder EDTA) oder unbeschichtete Blutröhrchen (Vollblut) gewonnen werden. Keine Blutröhrchen mit Trennhilfe (Gel) verwenden. Kein Vollblut verwenden. Unmittelbar nach der Blutentnahme, die Proben homogenisieren indem die Blutröhrchen mehrmals gewendet werden. Die Blutprobe zentrifugieren oder das Vollblut bei Zimmertemperatur im unbeschichteten Röhrchen koagulieren lassen, das Serum oder Plasma in ein sauberes Röhrchen umschichten. Die Probe darf weder hämolytisch noch lipämisch sein. Sie muss klar sein. Röhrchen mit Namen des Tieres und Entnahmedatum kennzeichnen. Das Plasma oder Serum kann einige Tage im Kühlschrank (2–8°C) gelagert werden. Für eine längere Lagerung muss die Probe eingefroren (-20°C) werden.

Testverfahren
Vor Testbeginn während 2 h die Testkomponenten und die Proben Zimmertemperatur annehmen lassen. Das Testkit kann während eines ganzen Tages bei Zimmertemperatur gelagert werden.

Die Zeitangaben unter Punkt 1, 3 und 7 müssen genau eingehalten werden:

Schritt 1: Mit steriler Einmalpipette 8 Tropfen Serum oder Plasma in die Mitte des Testzylinders auftragen. 2 Minuten warten

Schritt 2: 4 Tropfen der Spüllösung 1 in die Mitte des Testzylinders hinzufügen. Warten, bis die Flüssigkeit vollständig aufgesogen ist. Diesen Spülvorgang nochmals wiederholen.

Schritt 3: 3 Tropfen des Konjugats (Fläschchen mit rotem Deckel) in die Mitte des Testzylinders hinzufügen. 1 Minute warten

Schritt 4: Den Testzylinder mit der Spüllösung 2 bis unter den Rand auffüllen, dies entspricht ca. 20 Tropfen. Warten, bis die Flüssigkeit vollständig aufgesogen ist.

Schritt 5: Ein neues Substrat in dem Mischfläschchen für Substrate (Fläschchen mit blauem Deckel) herstellen: Je 1 Masseinheit von Substrat A und Substrat B (Fläschchen mit schwarzem Deckel) in das Mischfläschchen füllen, indem jeweils der Tropfenzähler bis zur schwarzen Linie aufgefüllt wird. Gut schütteln. Das Substrat sollte nicht zum Vorneherein hergestellt werden, da es sich bereits nach 30 Minuten zersetzt.

Schritt 6: 4 Tropfen des frisch hergestellten Substrates (Mischfläschchen mit blauer Etikette) in die Mitte des Testzylinders hinzufügen. Den unverwendeten Rest dieses Subtrates nach 30 Minuten verwerfen. Entleertes Mischfläschchen für weitere Tests aufbewahren.

Schritt 7: Das Ergebnis lässt sich nach 9 Minuten ablesen. Das Resultat mit Hilfe der beiliegenden Farbkarte ablesen und aufzeichnen.

Testauswertung
Die erscheinende Farbe im Testfeld am Ende eines Testdurchlaufs korrespondiert jeweils mit einem entsprechenden Progesteronspiegel. Die zum Kit zugehörige Farbkarte ist ein Hilfsmittel zur Bestimmung der Farbnuancen.

Die untenstehende Tabelle dient als Leitfaden zur Verfolgen des Verlaufs der Läufigkeit bei der Hündin:

* Diese Empfehlungen können lediglich einen Leitfaden darstellen, kein diagnostisches Verfahren kann von sich behaupten, 100%-ig sichere Ergebnisse zu liefern. Daher sollte der behandelnde Tierarzt zur Diagnosestellung immer die Anamnese und die Befunde der klinischen Untersuchung mit in Betracht ziehen.

Dieses Testkit soll den praktizierenden Tierarzt darin unterstützen, das Progesteron im Serum oder dem Plasma der Hündin semiquantitativ nachzuweisen. Die abschliessende Diagnostik unterliegt dem Vorrecht und der Verantwortung des behandelnden Tierarztes. Bio Veto Test kann nicht haftbar gemacht werden für Konsequenzen, die mit einer falschen Handhabung oder einer falschen Interpretation der Testergebnisse zusammenhängen.

Lagerung/Haltbarkeit
Im Kühlschrank (2–8°C) lagern. Nicht einfrieren. Die Haltbarkeit beträgt 14 Monate ab Herstellungsdatum. Das auf den Verpackungen angegebene Verfallsdatum beachten.

Handelsformen und Kitkomponenten
Ein Testkit mit 6 Tests enthält:
6 Testzylinder
1 Fläschchen mit Substrat A
1 Fläschchen mit Substrat B
1 Fläschchen mit Spüllösung 1
1 Fläschchen mit Spüllösung 2
1 Mischfläschchen für die Substrate
1 Fläschchen mit Konjugat
6 Einmalpipetten
1 Farbkarte
1 Packungsbeilage

Vertrieb: Virbac AG, Europastrasse 15, 8152 Glattbrugg
Hersteller: Bio Veto Test, 285 Avenue de Rome, F-83500 La Seyne sur Mer